新生儿采血卡厂家讲解乙醇沉淀纯化法

发布日期：2019-01-26 作者：点击：

新生儿采血卡厂家讲解乙醇沉淀纯化法

对于乙醇沉淀纯化法，新生儿采血卡厂家讲解如下：实验室台式离心机，通过首先确保溶液中存在正确浓度的正离子来沉淀DNA（过多会导致大量盐与DNA共沉淀，过少会导致DNA不完全恢复），然后加入2-3个体积的DNA至少95％的乙醇。许多方案建议此时在低温下储存DNA，但也有人认为它可能无法改善DNA回收率，甚至可能在使用过夜培养时间时降低沉淀效率。因此，在室温下可以实现良好的效率，但是当考虑到可能的降解时，最好在湿冰上孵育DNA。最佳孵育时间取决于DNA的长度和浓度。较小的碎片和较低的浓度将需要更长的时间才能实现可接受的恢复。对于非常小的长度和低浓度，建议进行过夜孵育。在这种情况下，使用载体如tRNA ，糖原或线性聚丙烯酰胺可以大大提高恢复。

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在孵育期间，DNA和一些盐将从溶液中沉淀出来，在下一步骤中，通过在微量离心管中以高速（~12,000g）离心收集该沉淀物。离心的时间和速度对DNA回收率的影响最大。再次，较小的片段和较高的稀释度需要更长和更快的离心。离心可以在室温或4℃或0℃下进行。在离心过程中，沉淀的DNA必须通过乙醇溶液移动到管的底部，较低的温度增加溶液的粘度，较大的体积使距离更长，因此这两个因素都降低了该过程的效率，需要更长的离心以获得相同的效果。离心后，除去上清液，留下粗DNA 沉淀。颗粒是否可见取决于DNA的量和纯度（更容易看到更脏的颗粒）或使用共沉淀剂。