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一、聚苯乙烯细胞培养皿(塑料培养皿)是生命科学实验室中最基本的工具。因此体外的玻璃形式由Petri于1887年引入。除疏水性塑料的几何改性和亲水转化外,聚苯乙烯塑料培养皿在130年内基本保持不变。今天,聚苯乙烯培养皿在药理学和生物材料测试(细胞培养,动物模型,临床试验)的开始,它用于询问细胞,但也用于人类生命的开始,即体外受精。以前的实验工作挑战了聚苯乙烯培养皿的生物耐受性:Sommer等。表明当与水性介质接触时,聚苯乙烯变软,促进纳米级碱性层的形成的效果与包埋的ROS一起对细胞具有不利影响。
二、在干燥之前,应该没有来自缓动剂的内脏的食物。在干燥前一天执行这些步骤。
1.将~2 mL泉水倒入新的35 mm塑料培养皿中。
2.将缓释剂转移到含有泉水的新菜中,将其从食物中分离出来。通过在室温下将它们留在盘子中过夜来使心脏病死亡。
3.将含有~5 mL 10%甘油溶液(1份甘油,9份泉水)的玻璃表盘放入带盖的小塑料盒中。
4.将盒子在室温下放置过夜(约16小时)。
5.使用湿度计检查腔室内的湿度。约16小时后相对湿度应> 90%。准备琼脂涂层培养皿盖在使用当天准备琼脂涂层的盖子。不要存放或重复使用涂层盖子。
6.用瓶装泉水准备2%琼脂溶液,煮沸。
7.将 300μL沸腾琼脂溶液移液到35mm培养皿的盖子中。丢弃盘子本身; 只使用盖子。
8.快速工作,使用移液器的尖端将琼脂溶液均匀地分布在整个盖子周围。尽量减少过量的琼脂和不均匀的分布。
9.将盖子侧面倾斜,使多余的琼脂汇集到一侧。用移液管从盖子侧面取出并丢弃多余的琼脂。
10.让薄琼脂涂层固化并干燥5-10分钟。
11.使用微量移液管将步骤2中的饥饿的缓动剂转移到步骤10的琼脂涂覆的皿盖上。尽量减少随着缓步移植的水量。
12.使用微量移液管从盘盖上除去多余的水。
13.将含有缓动剂的琼脂涂层盖子放入步骤5的加湿室中,并孵育过夜(约16小时)。
14.从加湿室中取下盖子,用解剖显微镜检查干燥的样品。标本应该采用圆形的墩状外观。
15.将缓动剂保持在环境湿度(~40%相对湿度)下24小时,然后在室温下将其覆盖在干燥器中。
16.将 2 mL瓶装泉水移入培养皿盖。
当在解剖显微镜下观察时,已经干燥储存24小时的缓动剂在10分钟内开始退出其屯状态。通常在30-60分钟内观察到协调运动。生存率通常为~80%,并通过对协调运动和对刺激的反应(用微量移液管尖端接触)进行评分来判断。