采血卡厂家诠释从血液样本中提取DNA

发布日期：2019-10-08 作者：点击：

采血卡厂家诠释从血液样本中提取DNA

关于DNA如何从血液中提取，下面由采血卡厂家为大家诠释如何从血液样本中提取DNA。首先通过使用低渗缓冲液（碳酸氢铵和氯化铵; Himedia）裂解红细胞（RBC）来分离来自全血的淋巴细胞，对淋巴细胞具有最小的裂解作用。将三体积的RBC裂解缓冲液加入血液样品中并通过涡旋混合并彻底倒置5分钟并以20,00g离心（Eppendorf 5415R）10分钟。大部分上清液丢弃，留下约1ml以防止细胞损失。向沉淀中加入3体积RBC裂解缓冲液，并将涡旋，翻转和离心步骤重复2-3次，直至获得澄清的上清液和干净的白色沉淀。最后一次洗涤后，将上清液完全弃去，将沉淀重悬于500μlPBS中，然后加入400μl细胞裂解缓冲液（10mM Tris-HCl，10mM EDTA，50mM NaCl，10％SDS，pH 7.5）和10μl蛋白酶K（10mg / ml原液; Himedia）。将样品涡旋以完全溶解沉淀，并在56℃下在水浴（CW-30G; Jeio Tech）中孵育2小时以进行裂解。随后将等体积的苯酚（用Tris平衡，pH8）加入管中并通过倒置1分钟充分混合。将管在10,000g （4℃）下离心10分钟，将含水上层转移到含有等体积（1：1）苯酚和氯仿：异戊醇（24：1）的新管中。通过倒置将管混合1分钟并以10,000g （在4℃下）离心10分钟。然后将上清液转移到新管中，加入10μl10mg/ ml RNase A（Fermentas，Thermo Scientific）。

将样品在37℃下孵育30分钟，然后加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）并通过将管倒置1分钟并在10,000g （4℃）下离心10分钟进行混合。将上清液转移到新管中，加入两倍体积的无水乙醇（Merck）并轻轻倒转几次并在-20℃下冷却，然后在10,000g （4℃）下离心20分钟。弃去上清液，加入250μl70％乙醇，轻轻敲打沉淀，然后以10,000rpm离心10分钟并轻轻倒出上液。颗粒在层流气流中风干，将干燥的沉淀重悬于50μl无核酸酶的水或1×TE缓冲液中，并在-20℃或-80℃冷冻储存。